中國調味品協(xié)會于今年召開了《醬油中乙酰丙酸測定方法》行業(yè)標準討論會及審定會。會后，中國調味品協(xié)會按照標準報送程序將該行業(yè)標準報送至中華人民共和國商務部。目前，該行業(yè)標準已經(jīng)進入審批階段?，F(xiàn)將該行業(yè)標準報批稿以附件形式在網(wǎng)上公示：

                              醬油中乙酰丙酸的測定方法

1范圍

本標準規(guī)定了用氣相色譜法測定醬油中乙酰丙酸的方法。
本標準適用于醬油中乙酰丙酸的測定。
本標準方法的檢出限： 0.010g/kg。

（一）內標法

2原理
樣品經(jīng)酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，以正庚酸作內標物質，用具有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行測定，以內標法進行定量。
3試劑和溶液
除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑和蒸餾水或去離子水。
3.1無水硫酸鈉：650℃下灼燒4小時，貯于密閉容器中備用。
3.2無水乙醚。
3.3濃鹽酸。
3.4 飽和氯化鈉。
3.5標準品正庚酸：色譜純，純度≥99.5%。
3.6標準品乙酰丙酸：色譜純，純度＞98%。
3.7正庚酸標準溶液：稱取0.50g正庚酸標準品（精確至0.0001g）（3.5），用乙酸乙酯定容至100mL。此標準溶液的濃度為0.0050g/mL。
3.8乙酰丙酸標準溶液：稱取0.50g乙酰丙酸標準品（精確至0.0001g）（3.6），用乙酸乙酯定容至100mL。此標準溶液的濃度為0.0050g/mL。
3.9標準系列溶液：分別準確吸取乙酰丙酸標準溶液（3.8）0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mL于6個10mL容量瓶中,各加入1.0mL正庚酸標準溶液（3.7）,用乙酸乙酯定容，即得標準系列溶液，相當于每毫升含25，50，250，500，750，1000µg 的乙酰丙酸。
4儀器和設備
實驗室常規(guī)儀器、設備及下列各項：
4.1  100 mL具塞試管。
4.2 氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測器（FID）。
4.3色譜柱：石英彈性毛細管柱，柱長30m，內徑0.25mm，涂膜厚度0.5μm；固定液：Carbwax20M?；蚺c此相當?shù)纳V柱。
4.4  250mL圓底燒瓶。
4.5 濃縮設備（水浴、旋轉蒸發(fā)儀或氮吹儀）。
5分析步驟
5.1樣品提取
準確稱取5.0g試樣（精確至0.0001g）于100mL具塞試管（4.1）中，加入10mL飽和氯化鈉溶液、1.0mL正庚酸標準溶液（3.7）、濃鹽酸3.0mL（3.3），充分震搖1min后，加入50.0 mL無水乙醚，震搖萃取3-5min，靜置約10-15 min。待分層后，吸取上層乙醚萃取液于250mL圓底燒瓶（4.4）中，再重復萃取二次，合并乙醚萃取液，用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，棄去下層。乙醚層過過量無水硫酸鈉脫水，在45℃左右濃縮至近干，殘液用乙酸乙酯定容至10mL，即可上機。
5.2測定
5.2.1氣相色譜參考條件                           
色譜柱溫度：120℃，1min     230℃，4min；
進樣口溫度：270℃；
檢測器溫度：270℃；
進樣方式：分流進樣，分流比25:1；
進樣體積：1μL；
氫氣流速：30 mL/min；
空氣流速：300 mL/min；
尾吹氣：30 mL/min；
載氣：高純氮，純度大于99.999%，流速：1.0mL/min。
5.2.2定量
     用進樣器分別吸取1μL的標準系列溶液（3.9），注入氣相色譜儀，在上述色譜條件（5.2.1）下測定乙酰丙酸與內標物質的響應峰面積。以乙酰丙酸峰面積/內標物質峰面積為縱坐標，以乙酰丙酸濃度為橫坐標，繪制標準曲線或計算回歸方程。
     用進樣器吸取1μL的試樣（5.1），注入氣相色譜儀，在上述色譜條件（5.2.1）下測定試樣。根據(jù)標樣保留時間，確定乙酰丙酸和內標物質的峰位置，并記錄乙酰丙酸峰面積和內標物質峰面積，計算樣品中乙酰丙酸含量。
在上述色譜條件（5.2.1）下，通常保留時間為：乙酰丙酸約為14.6min，內標物質約為9.7min。
標準系列溶液的氣相色譜圖如下：

5.3空白試驗
    用5.0 mL蒸餾水代替試樣，按5.1-5.2的步驟做空白試驗。
5.4結果計算
 樣品中乙酰丙酸的含量 ，按式（1）計算：
5.5 精密度
    同一樣品，兩次平行測定結果之差，不得超過平均值的10%。

（二）外標法
6原理
樣品經(jīng)酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，用配有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，以外標法（標準曲線法）跟系列標準進行比較定量。

7試劑
    如非特別說明，本標準方法所用的水為蒸餾水，所用試劑均為分析純。
7.1 無水乙醚：不含過氧化物。
7.2 無水硫酸鈉。650℃以下灼燒4小時，貯于密閉容器中備用。
7.3 乙酸乙酯：經(jīng)重蒸餾處理。
7.4 6N鹽酸溶液：量取50mL濃鹽酸，用水稀釋至100mL。
7.5 乙酰丙酸標準品：色譜純，純度≥99.5％。
7.6 乙酰丙酸標準貯備液：準確稱取乙酰丙酸標準品（7.5）0.50g（精確至0.0001g），置于100mL容量瓶中，室溫下用乙酸乙酯（7.3）溶解稀釋并定容至刻度。此標準溶液濃度相當于5.0mg/mL乙酰丙酸。
7.7 乙酰丙酸標準系列溶液：吸取適量的乙酰丙酸標準貯備液（7.6），以乙酸乙酯（7.3）稀釋成每毫升相當于25，50， 100，500，750，1000mg 的乙酰丙酸。
8儀器和設備
實驗室常規(guī)儀器、設備及以下各項:
8.1 氣相色譜儀：配備氫火焰離子化檢測器。
8.2色譜柱：J&W DB-FFAP 色譜柱（柱長30m，內徑0.25mm，內膜厚度0.25μm，固定液：TPA改性聚乙二醇）或與之相當?shù)纳V柱。
8.3濃縮設備（旋轉蒸發(fā)器、恒溫水浴、真空泵）。
8.4 25mL具塞試管。
8.5 100mL 梨形濃縮瓶。
9分析步驟
9.1 樣品提取
室溫下準確吸取充分均勻的醬油樣品5.0g（精確至0.0001g）于25mL具塞試管中，加入6N鹽酸溶液（7.4）1mL，充分震搖均勻，往試管中加入25mL無水乙醚（7.1），充分震搖萃取1分鐘，靜置約10-15分鐘，待上層乙醚與下層樣品充分分層后，吸取上層乙醚提取液于100mL濃縮瓶中，之后重復進行上述的萃取操作兩次，每次加入無水乙醚的量均為20mL，三次的乙醚萃取液合并后經(jīng)無水硫酸鈉（7.2）進行吸水處理，于40℃下減壓旋轉蒸發(fā)濃縮至干，以乙酸乙酯（7.3）溶解殘留物并于室溫下定容至5mL，搖勻后靜置，待氣相色譜進樣檢測。
9.2 色譜參考條件
  色譜溫度：60℃，1min  18℃/min   200℃，1min  10℃/min   230℃，12min
進樣口溫度：260℃；
檢測器溫度：280℃；
進樣方式  ：不分流進樣；
進樣體積  ：1μL；
氫氣流速  ：35mL/min；
空氣流速  ：200mL/min；
載氣      ：氮氣，純度大于99.999％，流速：2.2mL/min；
尾吹氣    ：氮氣，純度大于99.999％，流速：27.8mL/min。

9.3 測定
以乙酰丙酸標準系列溶液（7.7）分別進樣1mL于氣相色譜儀中，測得不同的標準濃度下乙酰丙酸的響應峰面積，以乙酰丙酸的濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標，作一標準曲線并計算其回歸方程。
在相同的色譜條件下以上述處理后的樣品溶液（9.1）進樣1mL。測得的峰面積與標準曲線比較定量。
在上述色譜條件（9.2）下，標準系列溶液的氣相色譜圖如下：
9.4 結果計算

樣品中乙酰丙酸的含量按式（2）進行計算。
9.5 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10% 。